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用减毒沙门氏菌作为活载体构建新的PRRSV疫苗及其免疫原性

用减毒沙门氏菌作为活载体构建新的PRRSV疫苗及其免疫原性

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养猪新技术网讯:.

引言.

疫苗(vaccine)在控制世界范围内蓝耳病毒(PRRSV)方面起着非常重要的作用.

灭活疫苗不能引起细胞免疫反应,然而,活疫苗具有潜在的返毒可能性,及与PRRSV野毒株或疫苗毒株发生基因重组的可能性.

因此,预防PRRSV要求新型的疫苗既能诱导体液免疫,又能诱导细胞免疫.

PRRSV ORF5与GP6编码的蛋白GP5和GP6,具有很强免疫原性,刺激产生很好的中和抗体,对抗PRRSV的感染.

近年来,致弱沙门氏菌能够很好地刺激细胞免疫反应,在构建工程疫苗作为活的载体.

本研究中,构建致弱的沙门氏菌-蓝耳疫苗,评估其免疫原性.

材料与方法.

克隆PRRSV WUH-3株的ORF5和ORF6基因(登录号:HM853673),通过插入特定的基因序列来表达中和抗原从而修饰ORF5基因.

然后,单个扩增产物,或融合到asd+表达质粒pYA3493中,然后电转到致弱的猪霍乱沙门氏菌中,从而获得重组的猪霍乱沙门氏菌表达靶基因,候选疫苗肌注小白鼠来评估.

C501-GP5m免疫仔猪剂量为108.0CFU.

测定中和抗体(NA)和细胞免疫反应.

结果.

ORF5和ORF6基因经过大小和序列分析已经确定成功扩增.

单个原始蛋白GP5/修饰后的蛋白GP5 GP5/M和表达蛋白的分子量分别为27kD/29kD和43kD,培养基上清中的重组猪霍乱沙门氏菌通过Western blot检测,并分别命名为C501-GP5/C501-GP5m和C501-GP5/M),然而单个M蛋白没有表达.

3种重组猪霍乱沙门氏菌与原始宿主工程菌的生长曲线一致.

用实验动物模型小白鼠免疫接种109.0CFU,所有检验的候选疫苗中,C501-GP5m产生最高的中和抗体滴度.

在4周的淋巴细胞增生的反应区别不大,但是在这3组中,C501-GP5/M引起了强烈的反应.

C501-GP5m引发最高水平的IFN-γ.

根据实验模式动物的结果,在仔猪中进一步评估C501-GP5m的免疫原性.

C501YA-GP5m单独和在佐剂的刺激下产生的NA滴度分别为1:12.6和1:7.4.

结论与讨论.

构建了3种重组的致弱沙门氏菌疫苗株.

体外表达目的蛋白.

在小鼠动物实验中,重组体能够引起NA和细胞免疫反应.

C501-GP5m免疫的仔猪模型能够产生很好的NA滴度.

总之,我们构建了一个新的候选疫苗.

当前,主要关注点是毒力返强的问题和PRRSV活苗突变的问题.

ORF5编码GP5蛋白,是PRRSV的主要免疫原,但是中和表位的构象发生了改变,降低了其免疫原性.

本研究中,抗原表位通过插入的片段有效地表达.

最后通过动物实验显示这些重组体之中具有最好的免疫原性的一个.

蓝耳灭活苗和活苗的实际应用都会干扰流行病学诊断和PRRSV的调查,因为当使用ORF7蛋白免疫猪就会存在ORF7的抗体.

然而,我们的新疫苗将不会干扰目前的抗体检测试剂盒,因为该重组体不表达ORF7蛋白.

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